实时细胞活力检测——Realtime-Glo

RealTime-Glo™ MT Cell ViabilityAssay 是一种新型的非裂解性、均质生物发光法细胞活力检测系统，可检测细胞还原电位继而反应出细胞的代谢情况，而实时检测培养基中的活细胞数量。检测系统采用性能出众的 NanoLuc® luciferase 和可渗透细胞的 NanoLuc® 底物前体。活细胞可将特异性底物前体还原而产生 NanoLuc® luciferase 底物。这种底物可从细胞中扩散到外周的细胞培养基中，从而与 NanoLuc® Luciferase 快速反应而产生发光信号。信号强度与活细胞数量相关，因此可以用于细胞毒性研究。试剂最长可在 72 小时内保持性能稳定，对活细胞没有毒性。无需洗涤细胞，去除培养基，或加入其它试剂即可完成活细胞数量检测。试剂本身的非裂解的特性使其可在同一细胞培养孔中持续监测细胞，从而减少细胞用量和细胞培养的成本，细胞也可用于下游应用，包括多重检测和核酸分析。

图1.检测原理图示。

优势

实时细胞活力检测 : 实时监测细胞活力来确定细胞毒性的发作，参照一个简单的，基于多孔板操作的实验说明书可随着时间的推移分析药物的效力和有效性，进行细胞生长的变化。

卓越的灵敏度 :  生物发光检测系统，与基于还原电位检测比色和荧光细胞活力检测法相比，在更短的时间里检测出数据的信噪比更高，灵敏度更佳。

实验操作更灵活 : 可在铺细胞时同时加入试剂进行检测，或者与化合物一起加入，或者在任何需要检测细胞活力的时间点加入进行检测。另外，也可进行终点法细胞活力检测。

非裂解性检测模式 : 无需裂解即可检测。可与其他发光或荧光检测系统进行细胞的叠加检测而无需特殊滤片，细胞也可用于多种下游应用。只需少量细胞样本，即可获得更多的数据。

公认的细胞活力检测标志物:  检测原理是基于细胞还原电位的检测，这是公认的可信的细胞活力的代谢标志物。

可用于自动化高通量筛选：检测系统兼容自动化高通量操作。可在 96-, 384- 和 1,536 孔板这种低体积模式下检测。

应用  

· 确定细胞活力。

· 确定细胞毒性的发生。

· 分析药物效力和有效性。

· 分析细胞生长的差异。

· 确定上游分子应用的可行性。

图2.使用RealTime-Glo™ MT细胞活力检测试剂盒实时监测细胞活力，测定EC50。在384孔板中每孔加入40ul含有2X RealTime-Glo™ Reagent的培养基的A549细胞，细胞密度500个细胞/孔，再加入等体积2X bortezomib。72h监测发光信号。图A:每小时检测一次细胞活力(Tecan Infinite® P200 multimode reader with gas control module937C/5% CO2)。EC50 数值以GraphPad Prism®软件计算。图B. 如图所示，每个浓度与阴性对照组相比，细胞活力数据有3倍的变化。