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蛋白抽提和纯化产品指南

分析、纯化蛋白的第一步是打开细胞并从中分离出蛋白组分。蛋白抽提步骤极其关键,如果采用激烈的机械破碎或酶解,极易使蛋白暴露于易于降解的环境,而使目的蛋白的活性和完整性受到影响。为了帮助研究者提高蛋白抽提质量,特别是排除超声波操作,默克密理博Novagen推出了Buster系列优化去污剂及其它成分的裂解抽提试剂,其中BugBuster®用于大肠杆菌蛋白抽提。这种新型抽提试剂能非常温和、高效地从目的细胞中制备可溶蛋白。rLysozyme™溶菌酶溶液有助于提高BugBuster裂解细菌的效果。而加入Benzonase®核酸酶可以降解DNA和RNA,从而使蛋白样本粘度降低,易于纯化。Calbiochem的蛋白酶抑制剂混合物inhibitor cocktail的使用可以防止粗样中的蛋白水解。PopCulture®试剂可以从液体培养基中的大肠杆菌直接抽提蛋白而不需要离心收集细胞的步骤。


第一篇:细胞裂解与蛋白抽提


大肠杆菌抽提试剂盒:BugBuster Master Mix

  • 更快:采用预混优化试剂抽提,仅需10min室温孵育

  • 更容易:不需要超声仪,不需要对样品进行预处理

  • 更高效:活性蛋白产量获得成倍增加,超乎想象


酵母/植物细胞裂解与蛋白抽提:YeastBuster Master Mix

YeastBuster™可以高效抽提Saccharomyces cerevisiae、Pichia pastoris、P. stipidis、Schiz-osaccharomyces pombe等酵母细胞及植物细胞可溶蛋白,避免玻璃珠研磨法操作的不便和对蛋白的严重损耗。、


昆虫/哺乳动物细胞裂解与蛋白抽提:CytoBuster Master Mix

CytoBuster™温和的非离子成分可以分离具有功能活性的内源或表达蛋白,而不需要诸如超声处理或冻融等激烈的处理,抽提产物用于Western杂交、免疫沉淀和激酶/磷酸酶分析。昆虫PopCulture可以不需离心收集细胞,直接从昆虫细胞培养物中抽提蛋白。



蛋白抽提工具之:Benzonase核酸酶

来自细胞或组织材料的核酸往往对蛋白研究产生干扰,稳定、高效地排除核酸对蛋白质及其下游分析的影响,是获得好的蛋白研究相关数据的诀窍之一。默克密理博的Benzonase核酸酶是一种全能酶,可以降解所有形式的DNA和RNA(单链、双链、线形和环状),能迅速降低样品粘度并增加蛋白产量。


亚细胞蛋白抽提试剂:ProteoExtract Subcellular Proteome Extraction kit

默克密理博的ProteoExtract亚细胞蛋白质组抽提试剂盒专门用于从哺乳动物细胞和组织中快速高效地按亚细胞结构分离蛋白。蛋白产物可用于1D/2DGE、酶活分析(包括激酶活性分析)、蛋白定位研究、芯片检测(Microarray)、(非变性)胶电泳、免疫印迹及其它分析,如:ELISA等。

  • 获得4个组分:胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白及细胞骨架蛋白

  • 无需超高速离心,也无需在较高温度下孵育样品

  • 蛋白以天然活性状态被富集

  • 试剂盒成分完整,包括抽提缓冲液、蛋白酶抑制剂、Benzonase核酸酶等

  • 每个试剂盒可用于20次贴壁或悬浮细胞(3-5×106个细胞/次或20-50mg组织样本)处理



膜蛋白抽提的最佳选择:ProteoExtract Transmembrane Protein Extraction kit

膜蛋白及其复合物是信号通路研究中的重要对象。而膜蛋白一般较难溶解于常规抽提试剂,种类复杂而又多为低丰度蛋白,因此高效富集膜性蛋白及其复合物一直都是困扰研究者的难题。默克密理博秉承对化学试剂的深刻理解,先后开发了天然膜蛋白抽提试剂盒(M-PEK)和跨膜蛋白抽提试剂盒(TM-PEK),帮助您在不需要超速离心的情况下,以较少起始材料就获得足以进行下游分析的高品质膜蛋白、跨膜蛋白及膜蛋白复合物。

  • 特殊无去污剂配方,3-5倍富集天然有活性的膜蛋白及膜蛋白复合物

  • 起始材料低至5×106个细胞

  • 高效抽提跨膜次数多达7-12次的膜蛋白,如GPCR等

  • 可平行处理多个样品,无需超高速离心,两步操作,仅需1至1.5小时


细胞骨架蛋白抽提与染色

细胞骨架蛋白(包括肌动蛋白和大量相关蛋白)的变化涉及细胞内物质转运、细胞运动、增殖等重要功能,也是细胞周期调控和癌转移研究中的热点。要评估肌动蛋白及其相互作用蛋白,药物处理带来细胞骨架的改变,首先要求特异性、温和地制备细胞骨架组分,消除细胞其它成分对检测的干扰。

  • ProteoExtract®细胞骨架富集及分离试剂盒高效抽提活性细胞骨架蛋白,用于蛋白的细胞定位分析。

  • ProteoExtract®天然细胞骨架富集及染色试剂盒用于富集骨架蛋白/相关蛋白,进行原位IF(免疫荧光)染色。



细胞核蛋白抽提:Nuclear Extraction kit

Nuclear Extraction Kit用于细胞和组织核蛋白抽提,不需要超速离心。可以替代既麻烦又耗时的传统方法(需要7小时),高产的核蛋白兼容EMSA分析。该试剂盒提供的试剂足够进行100次从2-4×107个细胞或1g组织材料中抽提核蛋白。


高丰度蛋白去除试剂盒

去除血清样本中高丰度的白蛋白和IgG成分是提高biomarker研究灵敏度的样品制备基本手段,默克密理博的ProteoExtract高丰度蛋白去除试剂盒可以从体液如血浆或血清中高效、特异性地除去白蛋白或同时去除白蛋白和IgG,从而显著降低样品的复杂性,利于低丰度蛋白的检测,应用于发现生物标志物、新药毒理学研究、SELDI蛋白分析等方面。新推出的PureProteome磁珠版产品方便了小量多样本的操作。




第二篇:蛋白酶与磷酸酶抑制剂

蛋白的稳定性、完整性对于蛋白研究的每一个环节都是最基本的要求,Western blotting当然也不例外。借助我们的专业经验和优质的蛋白抽提试剂盒、蛋白酶抑制剂/磷酸酶抑制剂等工具,你可以制备完整、稳定、有活性的蛋白,用于各种分析,并取得重现性好的高水平研究数据。


蛋白酶抑制剂混合物

内源性和外源性的蛋白酶会在细胞或组织裂解后迅速降解蛋白。蛋白水解会大大降低蛋白样品的量和活性,增加数据分析难度。为了保证下游研究成功,在裂解细胞的步骤加入蛋白酶抑制剂混合物(或蛋白酶抑制剂)可确保蛋白免于降解,默克密理博Calbiochem®品牌的各种抑制剂混合物能保证全面、稳定地抑制蛋白酶活性,使蛋白样品保持完整。目录号为539134抑制剂混合物以1:500稀释成工作液,方便好用。

  • 方便:即用型液体小瓶包装

  • 抑制效果可靠:优化的配方,稳定、全面抑制各种蛋白酶活性

  • 专业:为哺乳动物、细菌、酵母、真菌和植物设计了专用的优化配方

  • 兼顾下游应用:不含EDTA的配方与金属离子螯合层析和2D电泳兼容

  • 用户友好型:成分公开,便于评估抑制效果及对后续实验的影响

  • 特别应用:提供非动物来源型抑制剂


磷酸酶抑制剂混合物

蛋白的磷酸化和去磷酸化调节信号转导事件,从而控制许多细胞活动,比如细胞分化、细胞增殖及细胞凋亡等等。蛋白激酶将磷酸基团转到特定的蛋白从而使目的蛋白磷酸化,磷酸基团的共价结合改变蛋白构象和配基相互作用能力。蛋白磷酸酶可以去除磷酸基团,使蛋白恢复到去磷酸化状态。从细胞和组织中抽提蛋白的过程中,用磷酸酶抑制剂混合物(如目录号524625等)和PhosphoSafe™磷酸化蛋白专用抽提试剂(目录号71296)对于保持蛋白的磷酸化状态非常关键。

  • 方便的即用型或即溶型小瓶包装

  • 针对不同样品中磷酸酶种类及活性不同,提供多种磷酸酶抑制剂组合

  • 成分公开,便于评估抑制效果及对后续实验的影响




文章分类: 应用文章